Test antigenico a Immunofluorescenza per il virus SarsCov2

Il Fiatest Antigen Fluorescent Immunoassay (FIA) utilizza un’avanzata tecnologia a flusso laterale basata sull’immunofluorescenza in un design a sandwich per il rilevamento qualitativo della proteina nucleocapside da SARS-CoV-2. Il test antigenico immunofluorescenza Fiatest, con gli analizzatori Fiatest Go e Novatrend , fornisce risultati automatizzati e oggettivi in 15 minuti, consentendo il test COVID-19 su pazienti sintomatici entro i primi cinque giorni dalla comparsa dei sintomi e pazienti asintomatici se testati in serie.

Il Virus Sars

Il virus Sars è una malattia virale ad ampio spettro che infetta gli esseri umani dal 1998. L’emergere del ceppo pandemico di Sars nell’uomo, con un’incidenza inferiore a 100 casi all’anno, è stato inaspettato perché il virus era relativamente stabile nella popolazione animale e non erano disponibili prove che fosse diventato attivo negli esseri umani.

Sebbene questo virus sia stato identificato come un importante patogeno umano, la sua storia nella popolazione umana è incompleta. Questo documento descrive un metodo per rilevare il ceppo SarsCov1 (Sars-CoV). Per testare l’infezione, i campioni nasofaringei devono essere raccolti prima di eseguire il test ed entro 48 ore dopo aver ricevuto il trattamento per prevenire la contaminazione da altri virus come l’HIV e l’influenza.

Il test antigenico a immunofluorescenza FIATEST (IFA) è un test rapido e sensibile che consente lo screening rapido di un’ampia varietà di campioni di siero per la ricerca di anticorpi contro varie proteine simili alle immunoglobuline (IgLP). Si basa su un test di legame anticorpo-antigene, che fornisce un rilevamento molto specifico dei determinanti antigenici sulle IgLP ma non rileva agenti infettivi come virus o batteri che raramente causano malattie tra gli esseri umani. La procedura IFA utilizza anticorpi monoclonali (MAb) anti-virus coniugati con Lissamine Red diretti contro specifici epitopi sugli antigeni dell’influenza A/PR/8/34 o SARS-CoV. Il MAb utilizzato in questo studio è stato prodotto dal nostro laboratorio con i seguenti passaggi:

1) Selezione dell’isotipo richiesta dai produttori;

2) Specificità antigenica confermata da ELISA competitivo utilizzando surnatanti di colture cellulari;

3) Produzione di anticorpi monoclonali mediante immunoglobuline umane ricombinanti (rHuIg);

4) Purificazione mediante cromatografia di affinità della proteina G per rimuovere il materiale non infettivo. Il MAb purificato avrà un peso molecolare compreso tra 1–2 kDa e dovrebbe essere in grado di legare il suo bersaglio con un’affinità inferiore a 100 nM quando diluito 1:1000 nel tampone diluente contenente Tris⋅HCl 25 mM pH 7,5 e NaCl 150 mM, 0,01% Tween 20, EDTA 2 mM, glicerolo 0%, Na 3 VO 4 1 mM, polivinilpirrolidone 10% v/v e albumina di siero bovino 5 µg/mL come soluzione accettore di proteine a pH 7,4;

Metodi

Mi chiamo Alfonso Parioli e sono uno studente laureato presso l’Università della California, Santa Barbara. Sto conducendo una ricerca per la mia tesi sulla rilevazione del virus SarsCov2.

Per questa ricerca, abbiamo sviluppato un nuovo test chiamato Immunofluorescence Antigenico (IFA) che rispetto al test dell’antigene di immunofluorescenza convenzionale (IFA-TB), può rilevare SarsCov2 tenendo conto dei falsi positivi dovuti alle risposte immunosoppressive.

In questo studio, utilizzeremo questo nuovo test per rilevare la presenza di SarsCov2 in campioni positivi con altri metodi come saggi molecolari ed esperimenti di coltura. Confronteremo anche l’immunofluorescenza antigenica (IFA) con i test convenzionali dell’antigene di immunofluorescenza (IFA-TB) per determinare se il nostro metodo è più sensibile dell’IFA-TB quando si tratta di rilevare SarsCov2. In secondo luogo, confronteremo l’immunofluorescenza antigenica (IFA) con i test di coltura eseguiti da altri ricercatori per determinare se il nostro metodo è più sensibile dell’IFA-TB quando si tratta di rilevare SarsCov2.

È stato ipotizzato che SarsCov2 possa essere un ulteriore ceppo di coronavirus che causa gravi malattie respiratorie nell’uomo e in altri animali come mucche e polli, ma questa ipotesi non è stata confermata da nessuno studio di laboratorio. La prima prova che supporta questa ipotesi è stata ottenuta da due diversi modelli animali: polmoni di suino trapiantati in scimmie rhesus e polmoni di pollo trapiantati in cavie infettate da SARS-CoV1A.

Risultati

Quindi, cos’è? Un test di immunofluorescenza antigenica (AI) è il test gold standard per la rilevazione del virus Sars-Cov2 (SarsCov2v) in pazienti con sintomi respiratori non specifici.

I test di intelligenza artificiale rilevano la presenza di anticorpi contro i coronavirus utilizzando antigeni derivati da proteine virali presenti nel sangue periferico del paziente infetto. L’antigene peptidico antigenico (PeptiA) e gli antigeni SARScov2V possono essere utilizzati rispettivamente come controlli positivi e negativi. I risultati dei test di intelligenza artificiale sono considerati altamente sensibili e specifici.

Conclusione

Fiatest  noto anche come test di immunofluorescenza è un metodo immunocromatografico ampiamente utilizzato per la rilevazione di agenti patogeni virali. I test antigenici possono essere applicati a un’ampia varietà di agenti patogeni virali, batterici, protozoari e fungini.

Il Virus Sars è stato segnalato per la prima volta nel settembre 2003 ed è un ceppo di coronavirus murino di recente circolazione. Il virus SarsCov2 condivide alcune delle sue caratteristiche strutturali con gli altri virus Sars come Marburg, sindrome respiratoria acuta grave (SARS-CoV) e malattie aviarie H5N1.

Il virus SarsCov2 appartiene alla famiglia Coronaviridae, sottofamiglia Togavirinae e genere Nairovirus. È non segmentato senso positivo RNA a filamento singolo senso negativo RNA a filamento singolo senso positivo RNA a filamento singolo senso negativo RNA a filamento singolo senso negativo RNA a filamento singolo senso positivo RNA a filamento singolo senso positivo filamento positivo filamento positivo filamento positivo filamento positivo Deformazione specifico antigenicamente attivo (SA) è il rilevamento diretto della proteina antigenica su entrambi i lati del virione mediante microscopia elettronica.

La risposta CTL al virus SarsCov2 coinvolge sia i linfociti T citotossici (CTL) sia le risposte anticorpali neutralizzanti mediate da anticorpi che sono mediate attraverso recettori specializzati sulle cellule dendritiche o sulle cellule effettrici o entrambe.

L’intensità della colorazione nelle cellule infettate da virus dipende dal tipo di pattern di espressione del recettore che esibisce dalle cellule infette, in particolare quelle con alti livelli di attivazione CTL come cellule dendritiche o cellule effettrici di vari ceppi come linfociti B, monociti/macrofagi, mastociti e cellule endoteliali.

Autore dell'articolo: Silvia